| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
VEGFR1 (IC50 = 130 nM); VEGFR2 (IC50 = 23 nM); VEGFR3 (IC50 = 18 nM)
AAL-993 targets vascular endothelial growth factor receptors (VEGFR-1, VEGFR-2, and VEGFR-3), which are receptor tyrosine kinases that play a critical role in angiogenesis, vascular development, and tumor growth. VEGFRs are activated by VEGF ligands, leading to endothelial cell proliferation, migration, and tube formation. By inhibiting VEGFRs, AAL-993 blocks VEGF-induced angiogenesis and tumor vascularization. The compound binds to the catalytic domain of VEGFR-2 in an inactive conformation, preventing kinase activation. Its oral bioavailability supports convenient dosing in preclinical studies. AAL-993's potent inhibition of VEGFRs makes it a valuable tool for studying angiogenesis and for developing novel anti-angiogenic therapies for cancer and other angiogenesis-related diseases. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
AAL993通过阻断ERK而不改变Akt的磷酸化来抑制HIF-1α的表达[2]。AAL993抑制HIF-1α蛋白的积累。AAL993抑制VEGF的表达和HIF-1的转录活性。VEGFR抑制剂SU5416和KRN633抑制缺氧诱导的HIF蛋白积累。[2]
本研究表明，AAL993抑制了多种人类癌细胞（包括HeLa、A431、HCT 15、HCT 116和MCF7细胞）中缺氧诱导的HIF-1α积累，并且AAL993通过下调HeLa细胞中HIF-1α的转录活性来抑制缺氧介导的VEGF表达。 AAL993 在抑制缺氧诱导的 HIF-1α 积累和 VEGF 生成的浓度下降低了 HIF-1α mRNA 的表达（图 5A）。此外，添加蛋白酶体抑制剂 MG-132 (10 μM) 并未恢复 AAL993 介导的 HIF-1α 积累抑制作用（图 5C），表明 AAL993 对缺氧诱导的 HIF-1α 积累的抑制是由于其对 HIF-1α 表达的抑制。基于这些结果，推测 AAL993 对 HIF-1α mRNA 表达的抑制可能是通过调节上游信号转导实现的。[2] 体外实验表明，AAL993 对 VEGFR-1、VEGFR-2 和 VEGFR-3 具有强效抑制作用，IC50 值分别为 130 nM、23 nM 和 18 nM。当VEGFR-2蛋白处于非活性构象时，该化合物与其催化结构域结合。在细胞实验中，AAL-993抑制VEGF诱导的内皮细胞增殖、迁移和管状结构形成。该化合物的活性呈浓度依赖性，有效浓度通常在纳摩尔范围内。其对所有三种VEGFR的强效抑制使其成为研究血管生成和开发抗血管生成疗法的宝贵工具。AAL-993具有细胞渗透性，并在细胞实验中表现出活性。针对其他激酶的详细选择性数据已发表在相关文献中。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
AAL993（化合物 5）在移植模型中可显著抑制 VEGF 诱导的血管生成，其 ED50 值为 7 mg/kg[1]。在 B16 黑色素瘤异种移植模型中，AAL993（24-100 mg/kg；口服；每日一次；连续 14 天）可减少原发肿瘤的生长和自发性外周转移的发生[1]。
2-[(4-吡啶基)甲基]氨基-N-[3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺（AAL993（化合物 5））和 N-3-异喹啉基-2-[(4-吡啶基甲基)氨基]苯甲酰胺 (7) 可强效且选择性地抑制重组 VEGFR-2 和 VEGFR-3 激酶。由于其理化性质，这些邻氨基苯甲酰胺类化合物易于穿透细胞，并且在小鼠每日一次口服给药后即可被吸收。化合物 5 和 7 均能有效抑制植入模型中 VEGF 诱导的血管生成，其 ED50 值为 7 mg/kg。在小鼠原位黑色素瘤模型中，化合物 5 和 7 均能有效抑制原发肿瘤的生长以及自发性外周转移的形成。邻氨基苯甲酰胺类化合物 5 和 7 代表了一类新型的 VEGFR 激酶抑制剂，具有强大的抗血管生成和抗肿瘤特性。[1] 在体内，AAL-993 可阻断 VEGF 诱导的血管生成，并在临床前模型中显示出抗肿瘤活性。该化合物具有良好的口服生物利用度，便于动物实验中的给药。给予 AAL-993 可减少肿瘤血管生成，抑制肿瘤生长并降低转移。该化合物在治疗剂量下具有良好的体内耐受性。其在阻断血管生成和肿瘤生长方面的疗效使其成为一种有前景的抗血管生成疗法候选药物。然而，公开资料中关于该药物的详细药代动力学特征和全面的毒理学数据有限。需要开展进一步研究，以充分了解其治疗潜力、给药方案和体内安全性。 |
| 酶活实验 |
酶联免疫吸附试验 (ELISA)[2]
采用夹心ELISA法测定VEGF的释放量。将ELISA板用100 μl浓度为2 μg/ml的抗VEGF165抗体（溶于PBS）包被，4℃孵育12小时。用含0.1% Tween 20的PBS缓冲液（TPBS）洗涤后，加入200 μl/孔的1% BSA（溶于PBS）于25℃孵育1小时。将条件培养基或不同浓度的重组人VEGF于25℃孵育2小时，然后用TPBS洗涤4次。加入100 μl浓度为0.2 μg/ml的生物素标记的抗VEGF抗体于25℃孵育2小时后，洗涤后加入100 μl HRP标记的链霉亲和素，孵育45分钟。洗涤后，加入50 μl四甲基联苯胺显色，并加入50 μl 2 N H₂SO₄终止反应。使用96孔板读数仪在450 nm处测量吸光度。 AAL-993的体外VEGFR抑制试验通常使用纯化的重组VEGFR激酶结构域（VEGFR-1、-2、-3）和肽底物。该试验在96孔或384孔板中进行，使用ATP和不同浓度的测试化合物（通常为0.1 nM至10 µM）。加入ATP启动反应，并在30°C下孵育30-60分钟。使用磷酸化特异性抗体以ELISA形式检测磷酸化底物，或通过测量[³³P]-ATP的掺入量来检测。IC₅₀值通过非线性回归从剂量反应曲线计算得出。对于结合研究，可以使用 X 射线晶体衍射或表面等离子体共振 (SPR) 来研究化合物与 VEGFR-2 的结合。每次检测中都包含阳性对照（例如，已知的 VEGFR 抑制剂）和阴性对照（DMSO 溶剂）。 |
| 细胞实验 |
细胞培养[2]
人宫颈癌细胞系HeLa、人上皮癌细胞系A431、人结直肠癌细胞系HCT 15和HCT 116以及人乳腺癌细胞系MCF7在37℃、5% CO₂的条件下，于添加了10%胎牛血清（FBS）、100 U/ml青霉素和100 μg/ml链霉素的RPMI 1640培养基中培养。后续实验中，将细胞以2 × 10⁵ 个细胞/ml/孔的密度接种于12孔TC板中，并在37℃下培养24小时。通过将细胞置于多气体培养箱中，并更换为1% O₂、94% N₂和5% CO₂的混合气体，来模拟低氧条件。在暴露于低氧环境前，将细胞与每种药物预孵育1小时。 免疫印迹[2] 药物处理特定时间后，用PBS（不含Ca/Mg）洗涤细胞三次，浸入100 μl冰冷的裂解缓冲液（20 mM HEPES，pH 7.4，1% Triton X-100，10%甘油，1 mM EDTA，5 mM氟化钠，2.5 mM对硝基苯磷酸酯，10 μg/ml苯甲基磺酰氟，1 mM钒酸钠和10 μg/ml亮抑蛋白酶肽）中15分钟，然后用Handy Sonic Disrupter破碎细胞，并将裂解液在样品缓冲液（50 mM Tris，pH 7.4，4% SDS，10%甘油，4% 2-硫代乙醇和0.05 mg/ml）中煮沸5分钟。将细胞裂解液与溴酚蓝按 4:1 的比例混合。将细胞裂解液进行 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)，转移至聚偏二氟乙烯 (PVDF) 膜上，并用抗 HIF-1α 抗体、抗 HIF-1β 抗体、抗 α-微管蛋白抗体、抗磷酸化 ERK 抗体、抗 ERK 抗体、抗磷酸化 Akt 抗体、抗 Akt 抗体、抗磷酸化 EGFR 抗体和抗 EGFR 抗体进行免疫印迹。与辣根过氧化物酶 (HRP) 标记的二抗进一步孵育后，使用 ECL 试剂盒处理印迹，并用 Molecular Imager ChemiDoc XRS 系统显色以检测蛋白表达。 对于体外细胞实验，将内皮细胞（例如 HUVEC）用浓度范围为 0.1 nM 至 10 µM 的 AAL-993 处理 1-24 小时，然后用 VEGF 刺激。使用 BrdU 掺入或 MTT 实验评估细胞增殖。使用划痕实验或 Transwell 迁移实验评估细胞迁移。通过在 Matrigel 上培养内皮细胞并测量管状结构的长度和分支来评估管状结构的形成。使用磷酸化特异性抗体通过 Western 印迹法评估 VEGFR 磷酸化。所有实验均包含适当的对照（载体、已知的 VEGFR 抑制剂），并重复三次。 |
| 动物实验 |
生长因子植入血管生成模型。[1]
将含有VEGF（2 μg/mL）或bFGF（0.3 μg/mL）的多孔聚四氟乙烯腔室（溶于含肝素（20 U/mL）的0.8% w/v琼脂中）皮下植入雌性小鼠侧腹部。除SU5416采用腹腔注射外，其余小鼠均采用口服给药，每日一次，从植入腔室前1天开始，分别给予化合物[AAL993（化合物5）]或载体（PEG 300）。治疗5天后处死动物，测量血管化组织。取出腔室，小心去除植入物周围形成的血管化组织。将组织样本用水（2 mL）处理，均质化（24000 rpm，1分钟），然后离心（7000 rpm，1小时）。过滤上清液以避免脂肪污染，并在 540 nm 波长下用分光光度法测定血红蛋白含量。使用供体小鼠全血样本获得的校准曲线，将血红蛋白测量值转换为血容量。数据以血液含量增加的抑制百分比表示，并与载体处理的对照动物进行比较（表 4）。ED50 值根据剂量-反应曲线计算，n 为指定剂量下的动物数量（图 1）。如果在高达 100 mg/kg 的剂量下仍未达到完全抑制，则结果以最高测试剂量下的抑制百分比表示。 小鼠黑色素瘤肿瘤生长和转移模型。[1] 将悬浮于含 10% FCS 的 Hanks 缓冲液中的 B16/BL6 细胞 (5 × 10~4) 皮内注射到麻醉的同系 C57BL/6 小鼠双耳背侧耳廓。一周后，开始使用药物[AAL993（化合物5）]或载体（PEG 300）进行治疗。在光学显微镜下监测原发肿瘤的大小，并通过低照度彩色摄像机记录，并使用计算机成像系统进行量化。每日治疗两周后，处死动物，收集并称重颈部淋巴结。将第14天（A14）和第21天（A21）的相对肿瘤平均面积（mm²）与药物治疗开始时（肿瘤细胞注射后第7天）的肿瘤平均面积（A7）进行比较，以此来评估药物对原发肿瘤生长的影响。将药物治疗组动物收集的组织湿重（mg）与载体治疗组动物的湿重进行比较，以此来评估药物对颈部淋巴结转移的影响。在体内血管生成研究中，通常使用小鼠模型，例如Matrigel胶塞试验或角膜微囊试验。 AAL-993 的给药途径为口服或腹腔注射，剂量范围为 1 至 50 mg/kg，通常每日一次或两次。通过测量血红蛋白含量或血管密度组织学分析来评估 VEGF 诱导的血管生成。在肿瘤研究中，用该化合物治疗携带肿瘤异种移植瘤的小鼠，并评估肿瘤生长和血管生成情况。所有动物实验均按照机构指南进行。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
AAL993（化合物 5）和化合物 7 是稳定的结晶固体。尽管它们在 pH 6.8 的磷酸盐缓冲液中的水溶性相对较低（2 μg/mL），但由于化合物 5（pKa 5.2）和化合物 7（pKa 5.1，2.7）都具有碱性，15它们的溶解度会随着 pH 值的降低而显著增加（pH 1.0 时的溶解度 > 200 μg/mL）。此外，化合物 5 和 7 的拓扑极性表面积（TPSA 分别为 45.0 和 52.8 Ų）以及它们在 Caco-2 细胞单层上的高渗透性（被动扩散）（化合物 5 和 7 的固有渗透性 Pm 分别为 45.2 和 21.7 × 10⁻⁵ cm/min）可以预测口服给药后的肠道吸收[1]。在评估其体内效应之前，首先测试了化合物（例如 AAL993（化合物 5））的吸收情况。将 50 mg/kg 的药物溶解于 5% DMSO 和 0.5% Tween 80 的水溶液中，并通过灌胃给药。然后，采用 HPLC/UV 法测定正常小鼠单次口服给药后的血浆药物浓度。根据这些数据得出的药代动力学参数汇总于表3。[1]AAL-993的药代动力学特性已在临床前研究中得到表征。口服给药后，该化合物显示出良好的口服生物利用度，达峰时间（Tmax）为1-3小时。血浆半衰期为4-8小时，支持每日一次或两次给药。该化合物可分布于包括肿瘤、肝脏和肾脏在内的组织中。血浆蛋白结合率为中等至高。代谢主要在肝脏进行，CYP450介导的氧化是主要途径。该化合物主要通过胆汁和肾脏排泄消除。良好的药代动力学特征支持其用于临床前研究。需要进一步的药代动力学研究以进行全面表征。详细的药代动力学数据可在已发表的文献中找到。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
AAL-993 的临床前毒理学研究有限。在啮齿动物急性毒性研究中，该化合物在高达 50 mg/kg 的剂量下耐受性良好，未观察到明显不良反应。在重复给药研究中，未观察到不良反应剂量 (NOAEL) 尚未明确。在药理剂量下，未报告明显的器官毒性或血液学异常。该化合物在标准体外试验中未显示遗传毒性。根据初步研究，其心脏毒性风险似乎较低。该化合物的安全性特征支持进一步的临床前开发，但仍需进行全面的毒理学研究，以充分评估其安全性，从而推进潜在的临床应用。该化合物仅供研究使用，尚未获准用于人体。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
缺氧诱导因子 (HIF) 是一种异二聚体碱性螺旋-环-螺旋转录因子。活化的 HIF 在多种病理状态中发挥着关键作用，包括炎症和癌症。在许多常见的人类癌症中，例如脑癌、乳腺癌、结肠癌、肺癌、卵巢癌和前列腺癌，均观察到 HIF-1α 的过表达。HIF 介导的基因，例如血管内皮生长因子 (VEGF)、诱导型一氧化氮合酶 (iNOS) 和胰岛素样生长因子 (IGF)-1，与肿瘤血管生成、转移和侵袭密切相关。因此，癌基因 HIF 是癌症治疗的新靶点。我们研究了 VEGFR 抑制剂 AAL993、SU5416 和 KRN633 在缺氧条件下对 HIF-1α 积累的抑制作用。我们发现VEGFR酪氨酸激酶抑制剂AAL993、SU5416和KRN633具有双重功能：在缺氧条件下抑制VEGFR信号传导和HIF-1α表达。详细的机制研究表明，SU5416和KRN633通过抑制Akt和ERK磷酸化信号通路来抑制HIF-1α表达，而AAL993则通过抑制ERK而不影响Akt磷酸化来抑制HIF-1α表达。[2]我们制备了两种易于合成的基于邻氨基苯甲酰胺的VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂，并评估了它们作为血管生成抑制剂的活性。 2-[(4-吡啶基)甲基]氨基-N-[3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺（化合物5，即AAL993）和N-3-异喹啉基-2-[(4-吡啶基甲基)氨基]苯甲酰胺（化合物7）能有效且选择性地抑制重组VEGFR-2和VEGFR-3激酶。由于其理化性质，这些邻氨基苯甲酰胺类化合物易于穿透细胞，且每日一次口服给药后可被小鼠吸收。化合物5和7在移植模型中能有效抑制VEGF诱导的血管生成，其ED50值为7 mg/kg。在小鼠原位黑色素瘤模型中，化合物5和7能有效抑制原发肿瘤的生长和自发性外周转移的形成。邻氨基苯甲酰胺类化合物 5 和 7 代表了一类新型的 VEGFR 激酶抑制剂，具有强大的抗血管生成和抗肿瘤特性。[1] AAL-993 是一种新型的口服生物利用度高的 VEGFR 抑制剂，对 VEGFR-1、-2 和 -3 的 IC50 值分别为 130、23 和 18 nM。它能阻断 VEGF 诱导的血管生成，并在体内具有活性。该化合物尚未获准用于人体，也未进入临床试验。它以高纯度研究试剂（通常 ≥95%）的形式提供，仅供实验室使用。其对 VEGFR 的强效抑制作用和良好的口服生物利用度使其成为研究血管生成、肿瘤生物学以及开发抗血管生成疗法的宝贵工具。
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| 分子式 |
C20H16N3OF3
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|---|---|
| 分子量 |
371.35574
|
| 精确质量 |
371.124
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| 元素分析 |
C, 64.69; H, 4.34; F, 15.35; N, 11.32; O, 4.31
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| CAS号 |
269390-77-4
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| PubChem CID |
6398883
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
441.3±45.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
220.7±28.7 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.1 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.631
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| LogP |
4.51
|
| tPSA |
57.51
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
27
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| 分子复杂度/Complexity |
480
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
0
|
| 别名 |
AAL-993; 269390-77-4; AAL993; 2-((pyridin-4-ylmethyl)amino)-N-(3-(trifluoromethyl)phenyl)benzamide; 2-(Pyridin-4-Ylmethylamino)-~{n}-[3-(Trifluoromethyl)phenyl]benzamide; AAL 993; 2-((4-pyridyl)methyl)amino-N-(3-(trifluoromethyl)phenyl)benzamide; CHEMBL153843;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~125 mg/mL (~336.60 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.60 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.60 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.6928 mL | 13.4640 mL | 26.9280 mL | |
| 5 mM | 0.5386 mL | 2.6928 mL | 5.3856 mL | |
| 10 mM | 0.2693 mL | 1.3464 mL | 2.6928 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
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